Paggamit ug pag-amping sa ultrafiltration centrifuge tube
1) Pagpili usa ka angay nga ultrafiltration tube.Timan-i nga ang UF membranes lahi sa ilang lebel sa tolerance sa lain-laing mga kemikal.Kasagaran, ang mga tubo sa ultrafiltration nga adunay 10 kDa nga gibug-aton nga gibug-aton sa molekula mahimong mapili nga adunay pagputol sa gibug-aton sa molekula nga kinahanglan dili molapas sa 1 / 3 sa gibug-aton sa molekula sa protina nga interes, sama sa 35 kDa.Kung ang molekular nga gibug-aton sa protina nga interes kay mga 10 kd, usa ka ultrafiltration tube nga adunay gibug-aton nga gibug-aton sa molekula nga 3 KD mahimong magamit.
(2) Ang ultrafiltration, bag-ong gipalit, uga, nga adunay ultrapure nga tubig nga gidugang sa wala pa gamiton ug ang tubig hingpit nga naagi sa lamad, ice bath o refrigerator nga gipabugnaw sa pipila ka minuto.Dayon ibubo ang tubig, ie ang protina nga likido, ug pila ang idugang, bisan asa nga dili labaw sa puti nga linya sa ibabaw sa tubo.Ang operasyon gaan, ug ang ultrafiltration tube kinahanglan nga precooled sa yelo sa dili pa idugang ang protina nga solusyon.
3) Ang masa ug ang sentro sa grabidad kay makaabot sa balanse.Timan-i nga ang rotational speed ug acceleration dili kaayo paspas, kon dili direkta nga makadaut sa ultrafiltration membrane.Gisugdan ang centrifugal ultrafiltration (centrifuge precooled sa 4 degrees).Pagkahuman sa RPM sa lainlaing mga centrifuges nakabig sa g, lahi kini.Ang acceleration sa centrifuge gipasibo sa usa ka minimum, pagkunhod sa pressure sa lamad.Timan-i, siguruha nga biyaan ang centrifuge pagkahuman naabot sa centrifuge ang katulin sa destinasyon, o kung adunay ka problema, dili nimo kini mahimo sa una nga higayon.Ang orientasyon sa lamad sa spindle gi-adjust sumala sa mga instruksyon (angular centrifuge case mao ang lamad sa axis perpendicular).Sa praktikal nga paggamit, ang kinatibuk-ang katulin sa rotation mas ubos kaysa sa mga panudlo, aron ang kinabuhi sa centrifuge tube mahimong mapalawig.
3) Ang masa ug ang sentro sa grabidad kay makaabot sa balanse.Timan-i nga ang rotational speed ug acceleration dili kaayo paspas, kon dili direkta nga makadaut sa ultrafiltration membrane.Gisugdan ang centrifugal ultrafiltration (centrifuge precooled sa 4 degrees).Pagkahuman sa RPM sa lainlaing mga centrifuges nakabig sa g, lahi kini.Ang acceleration sa centrifuge gipasibo sa usa ka minimum, pagkunhod sa pressure sa lamad.Timan-i, siguruha nga biyaan ang centrifuge pagkahuman naabot sa centrifuge ang katulin sa destinasyon, o kung adunay ka problema, dili nimo kini mahimo sa una nga higayon.Ang orientasyon sa lamad sa spindle gi-adjust sumala sa mga instruksyon (angular centrifuge case mao ang lamad sa axis perpendicular).Sa praktikal nga paggamit, ang kinatibuk-ang katulin sa rotation mas ubos kaysa sa mga panudlo, aron ang kinabuhi sa centrifuge tube mahimong mapalawig.
(4) Kung magkonsentrar sa nahabilin nga 1ml, kuhaa ang 50ul nga buffer solution, idugang ang 10ul nga pag-agos ug tan-awa kung adunay bisan unsang asul nga kolor, ingon usa ka paghukom kung ang ultrafiltration tube kulang sa protina.Kung leaky ang tubo, ibubo pag-usab ang ibabaw nga layer ug agos ngadto sa bag-ong tubo aron masugdan ang ultrafiltration.Aron mahibal-an nga tukma kung wala ang mga tubo, centrifuge sa 10min nga adunay 5mgml nga BSA sa wala pa ang pag-agos, pagdagan sa protina nga glue, o Bradford crude assay, ug ipadayon pinaagi sa pagdugang sa nahabilin nga konsentrado nga solusyon sa protina (nga naglihok sa yelo ug nagpugong sa mga protina sa pagpainit) hangtod ang tanan nga concentrate gidugang.Pag-amping sa panahon sa centrifugation kung mahitabo ang pag-ulan sa mga protina, nga mosangpot sa pagsira sa tubo.Kung mahitabo ang pag-ulan, tinoa kung ang piho nga hinungdan sa pag-ulan usa ka sobra nga konsentrasyon sa protina o usa ka dili angay nga buffer;Ang nahauna mahimong masulbad pinaagi sa ultrafiltration sa daghang ultrafiltration tubes nga dungan, pagkunhod sa konsentrasyon, ug ang ulahi pinaagi sa pagbayloay sa lainlaing mga solusyon sa buffer hangtod nga wala’y pag-ulan sa protina nga mahitabo.
(4) Kung magkonsentrar sa nahabilin nga 1ml, kuhaa ang 50ul nga buffer solution, idugang ang 10ul nga pag-agos ug tan-awa kung adunay bisan unsang asul nga kolor, ingon usa ka paghukom kung ang ultrafiltration tube kulang sa protina.Kung leaky ang tubo, ibubo pag-usab ang ibabaw nga layer ug agos ngadto sa bag-ong tubo aron masugdan ang ultrafiltration.Aron mahibal-an nga tukma kung wala ang mga tubo, centrifuge sa 10min nga adunay 5mgml nga BSA sa wala pa ang pag-agos, pagdagan sa protina nga glue, o Bradford crude assay, ug ipadayon pinaagi sa pagdugang sa nahabilin nga konsentrado nga solusyon sa protina (nga naglihok sa yelo ug nagpugong sa mga protina sa pagpainit) hangtod ang tanan nga concentrate gidugang.Pag-amping sa panahon sa centrifugation kung mahitabo ang pag-ulan sa mga protina, nga mosangpot sa pagsira sa tubo.Kung mahitabo ang pag-ulan, tinoa kung ang piho nga hinungdan sa pag-ulan usa ka sobra nga konsentrasyon sa protina o usa ka dili angay nga buffer;Ang nahauna mahimong masulbad pinaagi sa ultrafiltration sa daghang ultrafiltration tubes nga dungan, pagkunhod sa konsentrasyon, ug ang ulahi pinaagi sa pagbayloay sa lainlaing mga solusyon sa buffer hangtod nga wala’y pag-ulan sa protina nga mahitabo.
(5) Ang unang pipila ka mga lakang gigamit sa pagkonsentrar sa protina, ug kon ang buffer kay usbon, hinayhinay nga idugang ang bag-ong buffer (ultrafiltration pinaagi sa 0.22um ultrafiltration membrane) ngadto sa mga 1ml sa kinatibuk-ang protina, ug i-reconcentrate ngadto sa mga 1ml sulod sa tulo. sunod-sunod nga mga panahon, uban sa katapusan nga concentrated katapusan nga gidaghanon depende sa gitinguha nga protina konsentrasyon, kasagaran dili labaw pa kay sa 500ul, apan usab sa sulod sa 200ul.Makab-ot ang 1000 × o labaw pa sa tulo ka mga okasyon, sa esensya sa kadaghan nga pagbag-o sa buffer, ingon nga kalkulado sa labing menos 10 × o labaw pa nga pagpauswag sa gidaghanon sa matag higayon.
(5) Ang unang pipila ka mga lakang gigamit sa pagkonsentrar sa protina, ug kon ang buffer kay usbon, hinayhinay nga idugang ang bag-ong buffer (ultrafiltration pinaagi sa 0.22um ultrafiltration membrane) ngadto sa mga 1ml sa kinatibuk-ang protina, ug i-reconcentrate ngadto sa mga 1ml sulod sa tulo. sunod-sunod nga mga panahon, uban sa katapusan nga concentrated katapusan nga gidaghanon depende sa gitinguha nga protina konsentrasyon, kasagaran dili labaw pa kay sa 500ul, apan usab sa sulod sa 200ul.Makab-ot ang 1000 × o labaw pa sa tulo ka mga okasyon, sa esensya sa kadaghan nga pagbag-o sa buffer, ingon nga kalkulado sa labing menos 10 × o labaw pa nga pagpauswag sa gidaghanon sa matag higayon.
Oras sa pag-post: Nob-09-2022